人白介素1β （IL-1β）ELISA Kit 酶聯免疫試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中人白介素-1β（IL-1β）的水平。向預先包被了人白介素-1β（IL-1β）單克隆抗體的酶標孔中加入白介素-1β（IL-1β），溫育；溫育后，加入生物素標記的抗IL-1β抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入底物A、B，產生藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人白介素-1β（IL-1β）的濃度呈正相關。

試劑盒組成 :
1 標準品（128ng/L）
2 標準品稀釋液
3 酶標包被板
4 鏈霉親和素-HRP
5 30倍濃縮洗滌液
6 生物素標記的抗- IL-1β抗體
7 顯色劑A液 6ml
8 顯色劑B液 6ml
9 終止液 6ml
10 說明書 1份
11 封板膜 2張
12 密封袋 1個

標本制備 :
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。2-8度保存3天。-20度保存一個月。
2. 血漿：
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。2-8度保存3天。-20度保存一個月。
3. 尿液、胸腹水、腦脊液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。2-8度保存3天。-20度保存一個月。
4. 細胞培養上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。2-8度保存3天。-20度保存一個月。
5. 培養細胞
    檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。2-8度保存3天。-20度保存一個月。
6. 組織標本
    切割標本后，稱取重量。加入一定量的0.1mol/L的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，2-8度保存3天。-20度保存一個月。（一定的量通常實驗室指1g重的組織加入5ml的0.1mol/L的PBS，PH7.4的緩沖液。 用手工或勻漿器將標本勻漿化標本的時間以勻化標本為止，具體時間以實驗的標來定。）

操作程序 :
1．標準品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：
2．根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
3．加樣：1）空白孔：空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗IL-1β抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；2）標準品孔：加入標準品50μl，鏈霉素-HRP50μl（標準品中已事先整合好生物素抗體，故不加）；3）待測樣品孔:加入樣本40μl，然后各加入抗- IL-1β抗體10μl、鏈酶親和素-HRP50μl，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
4．配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5．洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6．顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
7．終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
8．測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
9.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。

檢測范圍：0.5ng/L→100ng/L
規格：    96T/盒
保存：    2-8℃
期：  6個月（2-8℃）

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