一、、靈敏、特異的抗體;
二、穩定的重復性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型;
五、限度的節省實驗經費。

常用方法及原理如下:
1. 夾心法:
夾心法常用于檢測大分子抗原,一般的操作步驟為:
a. 將具有一性的抗體固著(coating)于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體
b. 加入待測檢體,檢體中若含有待測的抗原,則其會與塑膠孔盤上的抗體進行一性鍵結
c. 洗去多余待測檢體,加入另一種對抗原一的一次抗體,與待測抗原進行鍵結
d. 洗去多余未鍵結一次抗體,加入帶有酶的二次抗體,與一次抗體鍵結
e. 洗去多余未鍵結二次抗體,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或儀器讀取呈色結果
原理:針對抗原分子上2個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體,將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物。
2. 間接法
間接法常用于檢測抗體,一般的操作步驟為:
a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余的抗原。
b. 加入待測檢體,檢體中若含有待測的一次抗體,則其會與塑膠孔盤上的抗原進行一性鍵結。
c. 洗去多余待測檢體,加入帶有酶的二次抗體,與待測的一次抗體鍵結。
d. 洗去多余未鍵結二次抗體,加入酶底物使酶呈色,藉儀器(ELISA reader)測定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評估有色終產物的含量即可測量待測抗體的含量。
原理:利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體。
3. 競爭法
競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制,一般用于檢測小分子抗原,其操作步驟為:
a. 將具有一性的抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體
b. 加入待測檢體,使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行一性鍵結
c. 加入帶有酶的抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行一性鍵結,由于塑膠孔盤上固著的抗體數量有限,因此當檢體中抗原的量越多,則帶有酶的抗原可鍵結的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結,即所謂競爭法之由來。
d. 洗去檢體與帶有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,當檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內留下之帶有酶的抗原越少,顯色也就越淺。
e. 當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時,一般會考慮使用競爭法ELISA。
雞網狀內皮組織增生癥病毒抗原(REV-Ag)ELISA試劑盒原理:將特抗體包被于固相載體表面,經洗滌后分成兩組:一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液,另一組只加酶標記抗原,經孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測定的未知抗原的量。