一抗的選擇要點和技巧:
一、單克隆和多克隆抗體的選擇
由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結合,就像導彈精確地命中目標一樣。另一方面,即使是同一個抗原決定簇,在機體內也可以由好幾種克隆來產生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應中,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現非特異性染色(可以通過封閉等避免)。
二、應用范圍的選擇
有的一抗只能用于 WB ( Western blotting)或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等;甚至表明石蠟切片或冰凍切片。購買抗體一定要注意你的需求是什么!
三、種屬反應性的選擇和來源
這一點很重要,表明這種抗體可能存在種屬差異,且這種抗體適合檢測哪種種屬動物體內的抗原。
一般兔來源的多是多克隆;而小鼠來源的多是單克隆,但也有另外。根據此來源來選擇相應的二抗。
本公司所有產品僅供科學實驗,不做其他科學實驗外的使用!
產品名稱 | PE標記的兔抗小鼠IgM |
英文名稱 | Rabbit Anti-Mouse IgM / PE |
貨號 | GOY-01K3398 |
英文名稱: Rabbit Anti-Mouse IgM / PE 交叉反應 :Mouse 英文別名: Rabbit Anti-Mouse IgM (PE); Immunoglobulin M;Mouse 標記 :Unconjugated 抗體來源 :Rabbit 抗體類型: Polyclonal 免疫原:Native Mouse IgM 純化方法 :affinity purified by Protein A 亞型 :IgG 性狀 :Liquid 濃度 :2.0 mg/ml 儲存液 :10 mM TBS (pH=7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% glycerol. 保存條件 :Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. |
一抗結構:
二抗的原理及特點:一、SABC法
原理:SABC法是利用鏈酶親和素(Streptavidin)與生物素(Biotin)特有的高度親和力這一生物學性質,先將生物素與辣根過氧化物酶(HRP)結合,形成生物素化HRP,然后與鏈酶親和素按一定比例混合,形成SABC復合物。用生物素化二抗與抗體結合,再與SABC復合物聯結形成抗原~抗體~生物素化二抗~ SABC復合物。后用底物顯色劑顯色。
特點:該法具有靈敏度高以及低背景染色等特點。
二、SP法
原理:根據生物素(Biotin) 與鏈霉親和素(Streptavidin)具有強結合力的原理設計。在一抗(兔源與鼠源)與相應的靶抗原結合后,生物素化標記的抗多價二抗與一抗特異結合;二抗上標記的生物素與標記了辣根過氧化物酶(HRP)的鏈霉親和素結合,形成抗原~特異性一抗~生物素化的二抗~HRP 標記的鏈霉親和素復合物。
特點:該法孵育時間短(通常為10min),靈敏度高以及低背景染色等特點。
三. Polymer酶標二抗法
原理:該法采用一段多聚氨基酸聚合物作為載體鏈,將該多聚物與二抗結合,然后可再標記上多個HRP/AP酶分子,所以同樣具有很高的信號放大作用。
特點:靈敏度高;操作步驟簡單;無需進行內源性的生物素封閉。
四. 直接酶標二抗法
該法是將HRP/AP酶分子直接標記于二抗上。因此需要普通的酶標二抗即可完成。實驗簡單,成本低,但是因為沒有信號放大作用,所以對很多表達豐度不是很高的抗原就可能檢測不到。
一抗和二抗的區別:
抗體就是平常所說的抗體,即能和抗原特異性結合。
抗體是能和抗體結合的,即抗體的抗體。主要用于檢測抗體的存在。
一抗是針對抗原的抗體,二抗是針對一抗的抗體。即抗體也可以充當抗原刺激機體產生抗體。也就是說,抗原進入機體刺激機體免疫系統產生免疫應答,由B細胞可以產生與相應抗原發生特異性結合的特殊蛋白質。
一抗二抗都是一種可以特異結合別的物質的基團,而且一抗可以至少結合兩種其他基團(底物和二抗)。
一抗:可以特異結合底物,就是識別出我們想要檢測的東西。一抗和底物結合與否用肉眼是看不出來的。
二抗:可以和一抗結合,并帶有可以被檢測出的標記(如帶熒光、放射性、化學發光或顯色基團),作用是檢測一抗。 如果一抗自己帶有可以被檢測出的標記(如帶熒光、放射性、化學發光或顯色基團),則不需要二抗。但這樣成本很高,因為一種一抗只識別一種底物。所以如的設計一般是二抗帶上可檢測標記,再來檢測一抗。而一抗識別底物。這樣,當一抗結合到底物上,就可以通過二抗檢測出來。
周期素依賴性激酶2封閉多肽 | RHOJ蛋白抗體 |
小腦肽1封閉多肽 | 泛甲基賴氨酸抗體 |
尾側型同源轉錄因子2/3封閉多肽 | 亞甲基四氫葉酸脫氫酶單克隆抗體 |
RNA結合蛋白38封閉多肽 | 低密度脂蛋白受體相關蛋白11抗體 |
細胞表面趨化因子受體6(CD196)封閉多肽 | 甘油三磷酸脫氫酶1抗體 |
RNA結合蛋白19封閉多肽 | eIF5A2蛋白抗體 |
細胞核因子/k基因結合核因子封閉多肽 | 增殖相關蛋白MAGOH抗體 |
醛縮酶A封閉多肽 | 磷酸化整合素β2(CD18)抗體 |
味覺受體蛋白家族2亞基16封閉多肽 | 鳥嘌呤交換因子16抗體 |
MYC結合蛋白2封閉多肽 | α型-過氧化酶活化增生受體抗體 |
椎骨蛋白2封閉多肽 | 胱抑素A/半胱氨酸蛋白酶抑制劑A抗體 |
MAP激酶激活死亡域蛋白4C封閉多肽 | Kelch樣蛋白30抗體 |
JM4蛋白封閉多肽 | PE標記的兔抗小鼠IgM磷脂酰肌醇-5-磷酸鹽-4激酶2型α抗體 |
促黑細胞激素γ1封閉多肽 | 花生四烯酸15脂氧合酶2抗體 |
睪丸癌中心體相關蛋白封閉多肽 | 骨骼肌蛋白FHL1抗體 |
關鍵詞:
PE標記的兔抗小鼠IgM Rabbit Anti-Mouse IgM / PE2.0 mg/ml2.0 mg/ml
上海谷研實業有限公司主要從事免疫學、分子生物學和常規生化試劑的銷售,主營產品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養基、標準溶液產品。銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司產品。
公司客戶遍布大學、研究所、醫院、衛生、商品檢驗檢疫、制藥公司、生物技術公司和食品工業等單位。
公司主推品牌: (進口、國產) Amresco 、Sigma、 Peprotech 、Corning 、BD Faclon 、Axygen、 Invitrogen、 Qiagen、 Hyclone 、Uscnlife、 Wako 、SantaCruz、sciencell、Gibco、R&D、Linco、Amersham、Millipore。