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產(chǎn)品簡介

BHK-21 [C-13] (倉鼠腎成纖維細胞)公司現(xiàn)貨出售的商品： 15.6-1000 pg/mL 腦膜炎奈瑟菌W135群(NM- W135)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 15.6-1000 pg/mL 腦膜炎奈瑟菌W135群(NM- W135)核酸檢測試劑盒 78-5000 pg/mL 登革熱病毒通用型(DFV-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 78-5000 pg/mL 登革

詳細內(nèi)容

公司簡介

操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來，吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的完全細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細胞，盡量去除胰酶細胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
產(chǎn)品信息：
產(chǎn)品名稱：BHK-21 [C-13] (倉鼠腎成纖維細胞)

規(guī)格：1×10⁶cells/T25培養(yǎng)瓶

貨號：GOY-01X0034

分類：細胞系

產(chǎn)品詳細介紹：

名稱BHK-21 [C-13] (倉鼠腎成纖維細胞)

別稱BHK 21; BHK21; Baby Hamster Kidney-21; Baby Hamster Kidney 21; Baby Hamster Kidney from litter No. 21; BHK

種屬敘利亞種金地鼠

年齡（性別）1日齡

組織來源正常腎

生長特性貼壁細胞

細胞形態(tài)成纖維細胞樣

背景描述BHK-21 [C-13]的親本細胞株是由I·A·Macpherson和M·G·P·Stoker于1961年3月從1日齡的倉鼠建立的。隨后84天連續(xù)培養(yǎng)，僅中斷8天進行凍存，通過單細胞分離建立了13號克隆，即BHK-21 [C-13]。BHK-21 [C-13]細胞可用作轉(zhuǎn)染宿主，用于表達包含選擇及擴增標記的DNA的載體。

生物安全等1

生長培養(yǎng)基MEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

倍增時間~12小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織完全被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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BHK-21 [C-13] (倉鼠腎成纖維細胞)艾格LT100肉湯 250g

營養(yǎng)肉湯（日本標準） Nutrient Broth（Japan） 250g

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關(guān)鍵詞：BHK-21 [C-13] (倉鼠腎成纖維細胞)

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