操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務。
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
溶組織內(nèi)阿米巴檢測試劑盒(熒光PCR法)價格 | GOY-01P63952 | 50T |
儲存條件:
產(chǎn)品僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性好,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄為止定量準確,重現(xiàn)性好的定量方法,已得到全的公認,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
解淀粉芽孢桿菌碳酸酐酶相關蛋白/腦蛋白10抗體Human EPS8(Epidermal growth factor receptor kinase substRate 8) ELISA Kit人異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A2/B1(hnRNP A2/B1)免疫試劑盒
冠突曲霉白介素-18受體α鏈抗體Human OxHDL(Oxidized high-density lipoprotein) ELISA Kit人異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A1(hnRNP A1)免疫試劑盒
廈門交替紅色桿菌轉(zhuǎn)錄阻抑蛋白CTCF抗體Human TUBA1B(Tubulin alpha-1B chain) ELISA Kit人異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A0(hnRNP A0)免疫試劑盒
喜濕小脆柄菇T淋巴CD1抗體Human IFNA21(IFN alpha 21) ELISA Kit人異質(zhì)核糖核蛋白Q(SYNCRIP/HNRPQ/NSAP1)免疫試劑盒
粘紅酵母磷酸化周期檢測點激酶2抗體Human ProCollagen II ELISA Kit人異鎖鏈素(IDES)免疫試劑盒
根瘤菌網(wǎng)格蛋白重鏈抗體Human ALD(Aldosterone) ELISA Kit人異檸檬酸脫氫酶(ICD)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌透明質(zhì)酸介導游走受體抗體Human Aldolase B ELISA Kit人異常凝血酶原(APT)免疫試劑盒
節(jié)桿菌2號染色體開放閱讀框24抗體Human IFNA21(IFN alpha 21) ELISA Kit人異腎上腺素(iso-Hyd)免疫試劑盒
魯氏毛霉2號染色體開放閱讀框60抗體Human ProCollagen II ELISA Kit人乙型肝炎病S2抗原(HBV preS2Ag)免疫試劑盒
空泡單胞菌磷酸化周期素依賴性激酶7抗體Human ALD(Aldosterone) ELISA Kit人乙型肝炎病S2抗體(HBV preS2Ab)免疫試劑盒
狹窄革菌磷酸化周期素依賴性激酶9抗體Human AO-IgG(Ovary-Immunoglobulin G) ELISA Kit人乙型肝炎病核心抗體IgM(HBcAb-IgM)免疫試劑盒
梨生殼囊孢磷酸化周期檢測點激酶1抗體Human CYP7B1(Cytochrome P450 7B1) ELISA Kit人乙型肝炎病核心抗體IgG(HBcAb-IgG)免疫試劑盒
米曲霉磷酸化周期檢測點激酶1抗體Human Aldolase B ELISA Kit人乙型肝炎病核心抗體(HBcAb)免疫試劑盒
潘諾尼亞鎖霉磷酸化抑癌基因p16抗體Human ZP-IgG(zona pellucida-Immunoglobulin G) ELISA Kit人乙型肝炎病表面抗體(HBsAb)免疫試劑盒
停乳鏈球菌磷酸化抑癌基因p16抗體Human EB-VCA-IgG(Epstein-barr virus capsid antigen-Immunoglobulin G) ELISA Kit人乙型肝炎病X抗原(HBxAg)免疫試劑盒
磷酸化抑癌基因p16抗體Human A16-IgG(Coxsackie virus A16-Immunoglobulin G) ELISA Kit人乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)免疫試劑盒
金針菇Flammulina│velutipes 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRHSP60 IgG抗體elisa試劑盒金松雙黃酮
: =ATCC9790資源名稱: 海氏腸球菌 質(zhì)量規(guī)格:>60%,BSHSP60 IgA抗體elisa試劑盒角鯊烯
鹽單胞菌Halomonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>70%,BSH-ras elisa試劑盒氧醉椒素
溶組織內(nèi)阿米巴檢測試劑盒(熒光PCR法)價格羥基尿素;氨基甲酰基羥胺;氨甲酰羥基胺;N-羥基脲
Hydroxyurea
其他 Hydroxycarbamide;Carbamoylhydroxylamine
產(chǎn)品規(guī)格: CP,98.5%
包裝:25克/100克
CAS號:127-07-1
別:CP
含量:≥98.5%
熔點:138~145℃
干燥失重:≤1.0%
相關物質(zhì):≤0.1%
性狀:或類顆粒或粉末,易溶于水和熱乙醇,微溶于冷乙醇、苯。遇水或熱不穩(wěn)定。無臭,無味。
用途:生化研究。靠形成游離的一氧化氮,結(jié)合到酶活性部位的酪氨酸而使核苷還原酶失活。這阻礙了脫氧核苷酸的合成
保存:2~8℃