
服務流程:接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
小腸結腸炎耶爾森菌檢測試劑盒(熒光PCR法)規格 | GOY-01P63921 | 50T |
儲存條件:
產品僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保7min。
3:熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性好,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄為止定量準確,重現性好的定量方法,已得到全的公認,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
盤長孢狀盤孢10號染色體開放閱讀框93抗體Human FAM92A1 ELISA Kit兔子抗酸性磷酸酶5b(TRAP5b)免疫試劑盒
乳桿菌屬10號染色體開放閱讀框63抗體Human FAM3D ELISA Kit兔子巨噬炎性蛋白5(MIP-5)免疫試劑盒
根瘤菌10號染色體開放閱讀框132抗體Human FAM8A1 ELISA Kit兔子巨噬炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)免疫試劑盒
耐寒短桿菌10號染色體開放閱讀框30抗體Human FAM40B ELISA Kit兔子巨噬炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)免疫試劑盒
齒梗孢霉10號染色體開放閱讀框140抗體Human FAM160B1 ELISA Kit兔子緊密連接蛋白1(ZO1)免疫試劑盒
彩色豆馬勃1號染色體開放閱讀框125抗體Human FAM160B2 ELISA Kit兔子金屬硫蛋白2(MT-2)免疫試劑盒
木蹄層孔菌1號染色體開放閱讀框129抗體Human FAM114A1 ELISA Kit兔子結締組織生長因子(CTGF)免疫試劑盒
布拉克須霉1號染色體開放閱讀框159抗體Human FAM116B ELISA Kit兔子窖蛋白Caveolin-1(CAV1)免疫試劑盒
白禿馬勃1號染色體開放閱讀框163抗體Human FAM164C ELISA Kit兔子膠原酶II(Collagenase II)免疫試劑盒
孢籃狀菌1號染色體開放閱讀框172抗體Human EYA4 ELISA Kit兔子膠原酶I(Collagenase I)免疫試劑盒
費希爾曲霉1號染色體開放閱讀框2抗體Human EYA3 ELISA Kit兔子降鈣素(CT)免疫試劑盒
大腸埃希菌1號染色體開放閱讀框19抗體Human EZH1 ELISA Kit兔子堿性成纖維生長因子(bFGF)免疫試劑盒
大腸埃希菌1號染色體開放閱讀框25抗體Human EXOSC2 ELISA Kit兔子甲狀腺素(T4)免疫試劑盒
白酒 總酸、總酯、固形物 1號染色體開放閱讀框31抗體Human F4/80 ELISA Kit兔子基質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)免疫試劑盒
表皮葡球菌1號染色體開放閱讀框51抗體Human EYA1 ELISA Kit兔子基質金屬蛋白酶9(MMP-9)免疫試劑盒
腫囊腐霉1號染色體開放閱讀框52抗體Human EYA3 ELISA Kit兔子基質金屬蛋白酶5(MMP-5)免疫試劑盒
: =IFO3197資源名稱: 黃微綠鏈霉菌 質量規格:>98%,BRToll樣受體6試劑盒尿素
: F31資源名稱: 腐生葡球菌 質量規格:>98%,BRToll樣受體5試劑盒牛磺鵝去氧膽酸
暗產色鏈霉菌Streptomyces│phaeochromogenes 質量規格:>98%,BRToll樣受體4試劑盒耐斯糖
小腸結腸炎耶爾森菌檢測試劑盒(熒光PCR法)規格人參皂甙Rc
Ginsenoside Rc
其他 20-[(6-O-alpha-L-Arabinofuranosyl-beta-D-glucopyranosyl)oxy]-12b-hydroxydammar-24-en-3b-yl 2-O-beta-D-glucopyranosyl-beta-D-glucopyranoside
產品規格: 分析標準品,98%
包 裝: 20毫克
CAS號:11021-14-0
別:Analytical standard
含量:≥98.0%(HPLC)
性狀:粉末
用途:生化研究。
保存:RT