操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
類志賀鄰單胞菌檢測試劑盒(熒光PCR法)說明書 | GOY-01P63919 | 50T |
儲存條件:
產品僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保7min。
3:熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性好,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄為止定量準確,重現性好的定量方法,已得到全的公認,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
蘋果雙殼菌腫瘤新因子1抗體Human FAM57B ELISA Kit兔子熱休克蛋白27(HSPB1/HSP27)免疫試劑盒
亮白曲霉膽固25α7羥化酶抗體Human FAM65B ELISA Kit兔子缺血修飾白蛋白(IMA)免疫試劑盒
雷夫松氏菌角蛋白3+12抗體Human FAM175A ELISA Kit兔子橋粒糖蛋白2(DSC2)免疫試劑盒
白酒 酒精度接頭蛋白CrkL抗體Human FAM71F2 ELISA Kit兔子列腺素E2(PGE2)免疫試劑盒
桔綠木霉色素P450 24A1抗體Human FAM71E2 ELISA Kit兔子列腺素E1(PGE1)免疫試劑盒
線蟲被毛孢色素P450 2R1抗體Human FAM185A ELISA Kit兔子列腺素A2 免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌銅代謝結構域蛋白10抗體Human FAM175A ELISA Kit兔子列腺素A1 免疫試劑盒
紫紅曲霉鈣周期素結合蛋白抗體Human FAM71E2 ELISA Kit兔子白蛋白(PA)免疫試劑盒
釀酒酵母7號染色體開放閱讀框69抗體Human FAM72A ELISA Kit兔子葡糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)免疫試劑盒
塔賓曲霉銅代謝結構域蛋白3抗體Human FAM185A ELISA Kit兔子皮質酮(CORT)免疫試劑盒
釀酒酵母19號染色體開放閱讀框71抗體Human FAM186B ELISA Kit兔子皮質(Cortisol)免疫試劑盒
pAAV-RC2異染色體同源蛋白1抗體Human FAM71F2 ELISA Kit兔子凝血因子Ⅱ(FⅡ)免疫試劑盒
蕈狀芽孢桿菌銅代謝結構域蛋白8抗體Human FAM124B ELISA Kit兔子黏多糖/糖聚糖免疫試劑盒
光黑腹菌氯霉素抗體Human FAM127A ELISA Kit兔子腦鈉素(BNP)免疫試劑盒
蜂房哈夫尼菌4號染色體開放閱讀款Human FAM127B ELISA Kit兔子內皮抑素(ES)免疫試劑盒
草木樨中華根瘤菌凋亡加強結構域蛋白11抗體Human FAM129A ELISA Kit兔子內皮素1(ET-1)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質量規格:>98%,BRTU3A蛋白試劑盒牛膝甾酮
哈茨木霉Trichoderma│harzianum 質量規格:>98%,BRTrem樣轉錄因子1試劑盒尿苷
核盤菌Sclerotinia│sclerotiorum 質量規格:>98%,BRTraf2結合蛋白試劑盒尿嘧啶
類志賀鄰單胞菌檢測試劑盒(熒光PCR法)說明書人參皂甙Re
Ginsenoside Re
產品規格: 分析標準品,98%
包 裝: 20毫克/1克
CAS號:52286-59-6或51542-56-4
別:Analytical standard
含量:≥98.0%(HPLC)
性狀:粉末
用途:生化研究。
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